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洗滌是決定實驗成敗的關鍵
發布時間： 2023-07-25 點擊次數： 1596次ELISA(酶聯免疫吸附試驗)是目前臨床上常用的免疫學檢驗方法,由于其試劑穩定,易保存,操作簡便,結果判斷較客觀,既適宜于大規模篩查試驗,又可用于少量標本的檢測,既可以做定性試驗也可以做定量分析,目前已廣泛用于微生物學,寄生蟲學,腫瘤學和細胞因子檢測等領域.EUSA有敏感性高,特異性強,重復性好的特點,但其同時存在影響因素多的不足,現就實驗操作中常見的影響因素進行分析實驗,以提高ELASA的實驗質量.
洗滌在ELISA過程中不是反應聚，但卻是決定實驗成敗的關鍵。洗滌的目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或抗體結合的物質以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯待塑料對蛋白質的吸附作用是普遍性的。因此在 ELISA 測定的反應過程中應盡量避免非特異性吸附，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。在標本和結合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯（吐溫，Tween）一類物質即右達到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯，為非離子型的表面張力物質，常作為助溶劑。根據脂肪酸的種類而對聚山梨酯編號，結合月桂酸的為聚山梨酯20，在ELISA中為常用。它的洗滌效果好，并具有減少非特異性吸附和增強抗原抗體結合的作用。
洗滌如不成功，特別在后一次，如有酶結合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標本內的非特異性IgG吸附在固相上而未被洗凈，也將與酶標抗體作用而產生干擾。
ELISA板的洗滌一般可采用以下方法:
①吸干孔內反應液。
②將洗滌液注滿板孔。
③放置2 min，略作搖動。
④吸干孔內液，也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數一般為3~4次，有時甚至需洗5~6次。
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