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ELISA試劑盒如何制備？
發(fā)布時(shí)間： 2014-06-17 點(diǎn)擊次數(shù)： 1867次elisa技術(shù)流程ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，ELISA試劑盒受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。 ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。
ELISA試劑盒的制備程序
1。酸化尿液或組織勻漿增加200萬鹽酸PH值3.5。允許坐在4°為15
分鐘。離心機(jī)樣品中微量2分鐘去除沉淀。
2。編寫的C18反相柱洗10毫升乙醇其次是10毫升去離子水。
3。將樣品在一個(gè)輕微的正壓獲得流動(dòng)率約0.5毫升/分鐘。洗衣服柱用10毫升水，其次是10毫升的15%乙醇，zui后10毫升已烷。洗脫樣本欄添加10毫升乙酸乙酯。
4。如果分析是立即執(zhí)行，蒸發(fā)樣本下的氮流。至少添加250µ信用分析緩沖區(qū)的干燥樣品。渦然后允許坐5分鐘的房間溫度。重復(fù)兩次。如果ELISA試劑盒分析是被延遲，如乙酸乙酯洗脫樣品溶液在-80°直到免疫是運(yùn)行。蒸發(fā)有機(jī)溶劑流下的氮在運(yùn)行前試驗(yàn)和重組如上。